Nup155 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405347-ACT

NUP155 codifica a Nup155, um componente central do complexo do poro nuclear que contribui para a integridade do envelope nuclear e para o transporte seletivo de proteínas e RNAs entre o núcleo e o citoplasma. A Nup155 participa do tráfego nucleocitoplasmático, da montagem do NPC e da remodelação do envelope nuclear associada ao ciclo celular, processos que influenciam a regulação gênica e a homeostase celular. A disfunção do poro nuclear pode perturbar o processamento de RNA e redes de sinalização que dependem de importação/exportação nuclear regulada, e o NUP155 tem sido associado a contextos de doença humana envolvendo defeitos no transporte nuclear, incluindo fenótipos de condução cardíaca e uma patobiologia mais ampla relacionada ao envelope nuclear. Essas características tornam o NUP155 um alvo útil para estudar como a arquitetura do NPC molda programas transcricionais e respostas ao estresse.

Nup155 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NUP155 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nup155 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NUP155 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NUP155, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nup155. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NUP155 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nup155 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nup155 em células tumorais com expressão de NUP155 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.