Nup153 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403206-ACT

O gene humano **NUP153** codifica a Nup153, uma nucleoporina dinâmica do complexo do poro nuclear que contribui para o transporte nuclear, a montagem do poro e a organização da arquitetura do cesto nuclear. A Nup153 interage com vias de importação/exportação mediadas por carioferinas e influencia o posicionamento da cromatina e programas transcricionais ao coordenar interações na periferia nuclear. Ao regular o tráfego núcleo-citoplasmático e a regulação gênica associada ao envelope nuclear, **NUP153** sustenta a progressão do ciclo celular e processos de manutenção do genoma. A desregulação de componentes do transporte nuclear, incluindo redes associadas à Nup153, é frequentemente estudada no contexto de sinalização proliferativa, respostas ao estresse e alterações na arquitetura nuclear relevantes para doenças.

Nup153 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NUP153 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nup153 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NUP153 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NUP153, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nup153. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NUP153 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nup153 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nup153 em células tumorais com expressão de NUP153 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.