NT-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402291

概要

ヒトのNTF4は、神経栄養因子ファミリーに属する分泌性増殖因子であるニューロトロフィン4（NT-4）をコードしています。NT-4は主にTrkB（NTRK2）受容体を介してシグナルを伝達し、MAPK/ERK、PI3K/AKT、PLCγの各経路を活性化します。NT-4は、神経細胞の生存、神経突起の伸長、シナプス可塑性、活動依存的な回路の維持を支えるほか、感覚系や末梢神経支配における役割も報告されています。神経栄養因子–TrkBシグナルの制御破綻は、神経変性、神経発達に関わる表現型、シナプス機能の変化と関連するとされており、NTF4は神経回路の結合性や栄養支持の機構研究において重要な標的となります。また、NTF4の発現やNT-4/TrkB経路の活性は、損傷応答やストレス関連の細胞リモデリングのモデルでも検討されています。

NT-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNTF4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NTF4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NTF4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NT-4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NT-4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NTF4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NT-4の機能に不可欠なNTF4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NTF4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NT-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNT-4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NTF4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NT-4 HDRプラスミド（h）および NT-4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNTF4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNTF4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。