NSD3 Plasmide Double Nickase (h): sc-402721-NIC

NSD3 (WHSC1L1) codifica una metiltransferasi della lisina degli istoni contenente un dominio SET, che regola l’accessibilità della cromatina e l’output trascrizionale tramite la metilazione dell’istone H3 e il coordinamento di complessi epigenetici di tipo reader/writer. Modellando gli stati di enhancer e promotori, NSD3 influenza programmi fondamentali che controllano la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e le risposte al danno del DNA, e si integra con processi più ampi di rimodellamento della cromatina e di elongazione trascrizionale. Alterazioni dell’attività o del dosaggio di NSD3 sono state associate a una deregolazione dell’espressione genica in contesti oncogenici, inclusi tumori in cui sono prominenti l’amplificazione di 8p11 e la riprogrammazione epigenetica, rendendolo un nodo utile per lo studio dei meccanismi di malattia guidati dalla cromatina.

NSD3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NSD3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NSD3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NSD3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NSD3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.