NSD3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402721-ACT

NSD3 (também conhecido como WHSC1L1) codifica uma metiltransferase nuclear de lisina em histonas com domínio SET, que atua como regulador de cromatina de programas transcricionais ligados à identidade celular e à proliferação. Ao depositar marcas de metilação nas histonas e coordenar-se com outros cofatores epigenéticos, o NSD3 contribui para a organização dos nucleossomos, a atividade de enhancers e a expressão gênica dependente da RNA polimerase II. A desregulação de NSD3 tem sido associada a estados de cromatina alterados observados em diversos cânceres, inclusive em contextos envolvendo amplificação de 8p11 e dependência transcricional aberrante. Essas características tornam o NSD3 um alvo útil para estudar o controle epigenético da sinalização oncogênica, programas de linhagem e a regulação gênica mediada por cromatina em células humanas.

NSD3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NSD3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NSD3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NSD3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NSD3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NSD3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NSD3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NSD3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NSD3 em células tumorais com expressão de NSD3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.