NSD1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421970-ACT

O gene Nsd1 de camundongo codifica a NSD1, uma metiltransferase de lisina em histonas que contém um domínio SET e catalisa principalmente a metilação de H3K36, moldando a acessibilidade da cromatina e os programas transcricionais. A NSD1 integra-se à regulação epigenética da expressão gênica durante o desenvolvimento, à especificação de linhagens celulares e ao controle transcricional ligado ao ciclo celular por meio da modulação de estados de enhancers e promotores. Alterações na atividade da NSD1 têm sido associadas a paisagens de cromatina desreguladas e a saídas transcricionais aberrantes implicadas em transtornos do desenvolvimento e na biologia do câncer, tornando-a um nó relevante para estudos de fenótipos guiados pelo epigenoma. Em sistemas murinos, a perturbação de Nsd1 é comumente usada para investigar mecanismos de diferenciação, estabilidade genômica e redes regulatórias de genes específicas de contexto.

NSD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Nsd1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NSD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Nsd1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Nsd1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NSD1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Nsd1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NSD1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NSD1 em células tumorais com expressão de Nsd1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.