Plásmido Doble Nickase (h) Nrf2: sc-400017-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Nrf2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Nrf2 (h) y el plásmido de doble nickasa Nrf2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a NFE2L2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Nrf2 Anticuerpo (H-6): sc-518033
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Nrf2 | sc-400017-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Nrf2 | sc-400017-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NFE2L2 codifica el factor nuclear relacionado con eritroide 2 (Nrf2), un factor de transcripción tipo cremallera de leucina básica (bZIP) que coordina la defensa celular frente al estrés oxidativo y electrofílico. Tras su estabilización y translocación al núcleo, Nrf2 se une a los elementos de respuesta antioxidante para inducir genes implicados en la síntesis de glutatión, la detoxificación de xenobióticos, la regeneración de NADPH y la proteostasis, integrando el control redox con el metabolismo y la señalización inflamatoria. Esta vía se entrecruza con la ubiquitinación dependiente de KEAP1, la señalización MAPK y la regulación de la autofagia, modulando las respuestas a la disfunción mitocondrial y a tóxicos ambientales. La actividad desregulada de Nrf2 se ha vinculado a una tolerancia al estrés alterada y a una reprogramación metabólica en diversos contextos relevantes para enfermedad, incluida la carcinogénesis, la neurodegeneración y estados inflamatorios crónicos.
Nrf2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NFE2L2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NFE2L2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NFE2L2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NFE2L2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.