NRF-1 CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-400938-ACT-2

ヒトNRF1は、核呼吸因子1（NRF-1）をコードしており、NRF-1は配列特異的転写因子として、電子伝達系の構成要素、ミトコンドリアの転写・複製機構（例：TFAM）、ならびに酸化的リン酸化とミトコンドリア生合成を支える因子群を含む核コード型ミトコンドリア遺伝子の発現を協調的に制御する。NRF-1は、プロテオスタシス、ヘム生合成、ミトコンドリア—核間コミュニケーションに関連する転写ネットワークを調節することで、細胞のエネルギー状態やレドックスのシグナルを細胞増殖プログラムと統合し、その結果として代謝リモデリングやストレス適応に影響を及ぼす。NRF1/NRF-1活性の破綻は、神経変性、心代謝疾患、がんといった文脈で観察されるミトコンドリア機能障害や生体エネルギー変化と関連づけられている。NRF1の遺伝子編集や機能攪乱により、ヒト細胞モデルにおけるミトコンドリア遺伝子制御、呼吸能、転写回路の機序研究が可能となり、オミクス解析に基づく経路マッピングや遺伝子型—表現型解析などにも応用できる。

NRF-1 CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NRF1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NRF-1 CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における NRF1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNRF1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NRF-1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNRF1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNRF-1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNRF1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNRF-1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。