NQO2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402200-ACT

O NQO2 humano (NRH:quinona oxidoredutase 2) codifica uma flavoproteína citosólica que catalisa a redução de quinonas e eletrófilos relacionados por dois elétrons, influenciando o equilíbrio redox celular e a capacidade de detoxificação. Ao modular o ciclo das quinonas e a formação de espécies reativas de oxigênio, o NQO2 se integra às respostas ao estresse oxidativo, ao metabolismo de xenobióticos e a redes redox mais amplas dependentes de NAD(P)H. Alterações na expressão e na atividade de NQO2 têm sido associadas a fenótipos ligados a estresse metabólico, inflamação e suscetibilidade celular a danos mediados por eletrófilos, tornando-o relevante para estudos mecanísticos de adaptação ao estresse. Em pesquisas de biologia do câncer e neurobiologia, o NQO2 é frequentemente investigado no contexto da homeostase redox, da sensibilidade a danos no DNA e de alterações de sinalização impulsionadas por metabólitos eletrofílicos.

NQO2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NQO2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NQO2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NQO2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NQO2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NQO2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NQO2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NQO2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NQO2 em células tumorais com expressão de NQO2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.