Nova-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404452-ACT

O gene humano **NOVA2** codifica a Nova-2, uma proteína de ligação a RNA enriquecida em neurónios que reconhece motivos YCAY para regular o splicing alternativo e outros eventos de processamento pós-transcricional de RNA. A Nova-2 molda a diferenciação neuronal e a função sináptica ao coordenar a inclusão e a exclusão de exões em redes de transcritos envolvidos no crescimento de neurites, na dinâmica do citoesqueleto e na neurotransmissão. Por meio desses programas de splicing, o **NOVA2** contribui para a manutenção da integridade dos circuitos neurais e para a regulação génica dependente de atividade. A desregulação ou variação patogénica em **NOVA2** tem sido associada a fenótipos do neurodesenvolvimento e a disfunção neurológica, o que o torna um alvo útil para estudos mecanísticos do processamento de RNA no sistema nervoso.

Nova-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NOVA2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nova-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NOVA2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NOVA2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nova-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NOVA2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nova-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nova-2 em células tumorais com expressão de NOVA2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.