Notch1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400167-ACT

ヒトNOTCH1は、Notch1膜貫通受容体をコードしており、発生および組織恒常性における細胞運命決定、増殖、分化を制御する接触依存性（juxtacrine）のNotchシグナル伝達の中核的メディエーターです。リガンド結合によりプロテオリティックな切断処理が誘導され、Notch細胞内ドメインが放出されて核内へ移行し、系譜特異化や幹／前駆細胞の維持を制御する転写プログラムを調節します。Notch1の活性は、WNT/β-カテニン、NF-κB、PI3K–AKT、TGF-βなどの経路と相互に作用し、状況依存的な転写出力の統合に寄与します。NOTCH1シグナルの異常は、がん生物学、免疫細胞の発生、ならびに心血管および神経発生過程に関与するとされ、機序解明研究における幅広い重要性を示しています。

Notch1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NOTCH1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Notch1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NOTCH1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNOTCH1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Notch1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNOTCH1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNotch1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNOTCH1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNotch1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。