Notch 4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400766-ACT

O gene humano **NOTCH4** codifica a Notch 4, um receptor transmembrana de passagem única que medeia sinalização justácrina para regular decisões de destino celular, comprometimento de linhagem e homeostase tecidual. Após a ligação do ligante, o processamento proteolítico libera o domínio intracelular de Notch, que se transloca para o núcleo e coopera com CSL/RBPJ e coativadores para controlar programas transcricionais que governam proliferação e diferenciação. A atividade de **NOTCH4** é estreitamente integrada a processos de desenvolvimento e associados à vasculatura e pode interagir com vias como WNT, TGF-β e sinalização inflamatória para moldar fenótipos de células endoteliais e imunológicas. A desregulação da sinalização de Notch 4 tem sido associada a respostas angiogênicas alteradas e a estados microambientais relacionados a tumores, tornando-a relevante para estudos mecanísticos de biologia oncogênica e vascular.

Notch 4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NOTCH4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Notch 4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NOTCH4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NOTCH4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Notch 4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NOTCH4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Notch 4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Notch 4 em células tumorais com expressão de NOTCH4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.