Notch 3 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-421933-ACT

マウスNotch3はNotch3受容体をコードしており、リガンド依存的なプロテオリティック切断によって活性化され、Notch細胞内ドメインが核へ移行することで転写を制御する一回膜貫通型の転写調節因子である。血管平滑筋細胞およびペリサイトにおいて、NOTCH3シグナルは、RBPJを介するカノニカルな転写制御と、TGF-β、PDGFR、MAPKなどの経路とのクロストークを通じて、細胞運命決定、成熟、ならびに血管の安定性の制御に寄与する。Notch3活性の変化は、心血管・神経血管領域における分化プログラムやリモデリング応答の破綻と関連しており、系譜可塑性や腫瘍細胞のシグナル伝達ネットワークの文脈でも頻繁に研究されている。そのためNotch3は、マウスモデル系において発生シグナル、細胞間コミュニケーション、転写状態の遷移を解析する際の一般的な標的となっている。

Notch 3 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Notch3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Notch 3 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Notch3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNotch3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Notch 3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNotch3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNotch 3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNotch3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNotch 3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。