NNT CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421922

概要

マウスのNntは、ニコチンアミドヌクレオチド・トランスヒドロゲナーゼ（NNT）をコードしており、これはミトコンドリア内膜に存在する酵素で、プロトン駆動力を利用してNAD(H)とNADP(H)の間のヒドリド（H⁻）移動を共役させます。NNTはミトコンドリア内のNADPHを産生することで、グルタチオン系およびチオレドキシン依存性の抗酸化システムを支え、酸化的リン酸化の過程でレドックス恒常性の維持に寄与します。NNT活性はミトコンドリア代謝、活性酸素種（ROS）の処理、ならびに酸化ストレスに起因する機能障害への感受性に影響します。Nnt/NNT機能の変化は代謝表現型やストレス応答不全と関連づけられており、ミトコンドリアの生体エネルギー学およびレドックス制御シグナル伝達の研究において重要です。

NNT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNnt遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Nnt内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Nntのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NNTタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NNTシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Nnt欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NNTの機能に不可欠なNntエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Nntゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NNT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNNT CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Nnt遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NNT HDRプラスミド（m）および NNT HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNntホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNnt標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。