NLP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406794

概要

NINLはninein-like protein（NLP）をコードしており、NLPは中心体および微小管に関連する因子として、中心体の構築・維持、微小管の係留、ならびに細胞内輸送や細胞分裂に必要な細胞骨格ダイナミクスを支えます。NLPは中心体成熟や微小管の核形成／編成に関わる過程と関連しており、これらは紡錘体形成を規定し、有糸分裂中のゲノム安定性の維持に寄与します。中心体および紡錘体制御の破綻は、増殖性疾患や染色体不安定性の表現型と関係するため、NINLは中心体機能と細胞周期進行を結び付ける経路の解明に有用な標的です。ヒト細胞におけるNINL研究は、微小管依存的輸送やオルガネラの空間配置機構の理解にも貢献します。

NLP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNINL遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NINL内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NINLのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NLPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NLPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NINL欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NLPの機能に不可欠なNINLエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NINLゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NLP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNLP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NINL遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NLP HDRプラスミド（h）および NLP HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNINLホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNINL標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。