NKp30 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403117-ACT

NCR3 codifica o NKp30, um recetor ativador expresso em células natural killer (NK) e em subpopulações de células T do tipo inato, que contribui para a vigilância imunitária ao reconhecer ligandos induzidos por stress nas células-alvo. A ligação do NKp30 desencadeia sinalização dependente de ITAM através de moléculas adaptadoras associadas, promovendo vias a jusante como a ativação de SYK/ZAP70, o fluxo de cálcio, a sinalização MAPK, a exocitose de grânulos citotóxicos e a produção de citocinas. Alterações na expressão ou na função de NCR3/NKp30 têm sido associadas a diferenças na capacidade de resposta das células NK em microambientes tumorais e durante infeções virais, sendo frequentemente estudadas no contexto de evasão imunitária e inflamação. Como recetor de superfície central na ativação de efetores inatos, o NKp30 constitui um alvo acessível para dissecar limiares de sinalização e a biologia recetor–ligando em células imunitárias humanas.

NKp30 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NCR3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NKp30 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NCR3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NCR3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NKp30. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NCR3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NKp30 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NKp30 em células tumorais com expressão de NCR3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.