NK-1R Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401004-ACT

TACR1 codifica o receptor humano de neurocinina-1 (NK-1R), um GPCR de classe A que se liga ao neuropeptídeo taquicinina substância P e se acopla principalmente à sinalização via Gq/11. A ativação do NK-1R promove a mobilização de inositol fosfato e cálcio dependente de fosfolipase C, com ativação a jusante de PKC, MAPK/ERK e programas transcricionais que modulam a excitabilidade neuronal, a inflamação neurogênica e a contratilidade do músculo liso. O TACR1 é expresso nos sistemas nervoso central e periférico, bem como em compartimentos imunes e epiteliais, conectando a comunicação neuroimune a respostas de barreira e vasculares. Alterações na sinalização TACR1/NK-1R têm sido associadas à biologia inflamatória e relacionada à dor, à desregulação das vias aéreas e gastrointestinal e a mudanças dependentes do contexto na sinalização do microambiente tumoral, apoiando estudos mecanísticos em modelos celulares relevantes para doenças.

NK-1R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TACR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NK-1R O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TACR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TACR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NK-1R. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TACR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NK-1R no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NK-1R em células tumorais com expressão de TACR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.