Nix Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419357-ACT

Bnip3l (Nix) é uma proteína da membrana externa mitocondrial que atua como um receptor seletivo de autofagia, ligando mitocôndrias danificadas a autofagossomos positivos para LC3 por meio do seu motivo LIR. Em células de camundongo, a Nix participa do controle de qualidade mitocondrial, da sinalização associada à apoptose e de vias responsivas à hipóxia, integrando sinais que influenciam o metabolismo oxidativo e a sobrevivência celular. É bem conhecida por seus papéis na mitofagia programada durante a maturação eritroide e por modular a renovação mitocondrial em tecidos sob estresse metabólico. A atividade desregulada de BNIP3L/Nix tem sido associada a alterações na homeostase mitocondrial e em decisões de destino celular relevantes para neurodegeneração, respostas cardíacas ao estresse e biologia do câncer em modelos experimentais.

Nix O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Bnip3l sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nix O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Bnip3l em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Bnip3l, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nix. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Bnip3l nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nix no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nix em células tumorais com expressão de Bnip3l silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.