NIMP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-413705-ACT

RTN4IP1 codifica a NIMP, uma proteína da matriz mitocondrial que interage com o componente da via do recetor NOGO, RTN4, e dá suporte à fosforilação oxidativa ao manter a função da cadeia respiratória e o equilíbrio redox. A NIMP contribui para a bioenergética mitocondrial, a homeostase de cofatores e a proteção contra o stress oxidativo, ligando a sua atividade à produção de ATP e à gestão de espécies reativas de oxigénio. Alterações na função de RTN4IP1 têm sido associadas a fenótipos de disfunção mitocondrial, incluindo apresentações neurodegenerativas e de neuropatia ótica, tornando-o relevante para estudos de controlo de qualidade mitocondrial e de sinalização de resposta ao stress. Em modelos de células humanas, a modulação da expressão de RTN4IP1 é usada para investigar vias que conectam o metabolismo mitocondrial à manutenção neuronal e à vulnerabilidade celular relevante para doenças.

NIMP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RTN4IP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NIMP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RTN4IP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RTN4IP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NIMP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RTN4IP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NIMP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NIMP em células tumorais com expressão de RTN4IP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.