NIF-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-435958-ACT

Zfp335 codifica a proteína nuclear murina NIF-1, um regulador transcricional implicado no controle, associado à cromatina, da expressão gênica durante o desenvolvimento e a especificação de linhagens. A NIF-1 tem sido associada a programas transcricionais relacionados a receptores nucleares e à via Notch, sustentando a regulação coordenada de proliferação e diferenciação. Em contextos imunes e neurais, redes transcricionais dependentes de Zfp335 contribuem para decisões de destino celular e para a manutenção da homeostase tecidual. A desregulação desses processos é relevante para estudos mecanísticos de distúrbios do desenvolvimento, disfunção imune e estados transcricionais oncogênicos, sem implicar desfecho clínico.

NIF-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Zfp335 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NIF-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Zfp335 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Zfp335, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NIF-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Zfp335 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NIF-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NIF-1 em células tumorais com expressão de Zfp335 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.