Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-418961

Descripción general

Chrng codifica la subunidad gamma del receptor nicotínico de acetilcolina (nAChR), un canal catiónico activado por ligando que se ensambla con otras subunidades del nAChR de tipo muscular para mediar la despolarización dependiente de acetilcolina en la unión neuromuscular. Durante el desarrollo del ratón, CHRNG es un componente clave del complejo receptor fetal y contribuye a la sinaptogénesis, a la maduración del músculo esquelético dependiente de la actividad y al control de la excitabilidad mediante un flujo rápido de iones y la señalización posterior vinculada al Ca2+. La alteración de la expresión de CHRNG o de la composición de subunidades puede perturbar la transmisión neuromuscular y los programas de diferenciación de las miofibras, proporcionando un punto de entrada mecanístico para estudiar fenotipos neuromusculares congénitos y del desarrollo. Por lo tanto, este gen es relevante para las vías que regulan la formación de la placa motora, el acoplamiento excitación–contracción y el calendario del desarrollo muscular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Chrng en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Chrng junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Chrng tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Chrng para la investigación de la señalización de Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Chrng críticos para la función de Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Chrng para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Chrng. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG (m) y el plásmido HDR Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Chrng para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Chrng definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.