NHE-2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404353-ACT

SLC9A2はNa⁺/H⁺交換体NHE-2をコードしており、NHE-2は細胞膜上に存在するアンチポーターとして、Na⁺の流入とH⁺の排出を共役させることで細胞内pH、細胞容積、ナトリウム吸収を調節します。NHE-2の活性は上皮におけるイオンおよび体液輸送を支え、粘膜バリア機能の維持にも寄与するため、経上皮性の電解質移動や酸塩基恒常性を制御する経路と関連します。さらに、pH依存的に酵素活性、細胞骨格ダイナミクス、細胞間接着の健全性を制御することを通じて、NHE-2は極性細胞における増殖やストレス応答にも影響します。Na⁺/H⁺交換の制御異常は、消化管および腎臓における輸送異常や炎症関連の表現型と関連づけられており、SLC9A2は上皮生理や疾患に伴う輸送リモデリングの機序研究において重要な標的となります。

NHE-2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC9A2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NHE-2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC9A2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC9A2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NHE-2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC9A2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNHE-2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC9A2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNHE-2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。