NF90 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402626-ACT

ILF3はNF90をコードしており、NF90は多機能な二本鎖RNA結合タンパク質として、mRNAの安定性、スプライシング、輸送、翻訳の制御を通じて、転写および転写後の段階で遺伝子発現を調節する。NF90はRNAプロセシングやストレス応答プログラムに関与し、抗ウイルスシグナル伝達や炎症性遺伝子の制御などを担うほか、転写装置およびRNA成熟機構との相互作用を介して細胞周期の進行を調節し得る。これらの作用により、ILF3/NF90はインターフェロン刺激遺伝子（ISG）の発現、RNA監視機構、リボヌクレオタンパク質複合体の組み立てといった経路に影響を及ぼす。NF90活性の異常やILF3発現の変化は、がん生物学、免疫介在性炎症、ウイルス感染に関連する状況で報告されており、遺伝子制御研究における機構的な結節点としての有用性を支持している。

NF90 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ILF3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NF90 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ILF3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はILF3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NF90の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のILF3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNF90依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびILF3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNF90経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。