Neutrophil Elastase CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400677-ACT

ELANEは、アズール顆粒に貯蔵されているセリンプロテアーゼである好中球エラスターゼをコードしており、脱顆粒や好中球細胞外トラップ（NET）形成の際に放出され、細胞外マトリックスを再構築するとともに、微生物および宿主由来タンパク質を分解します。その活性は、ケモカイン勾配を形成し炎症性メディエーターを調節することで自然免疫シグナル伝達に寄与しますが、周辺組織への二次的障害を防ぐため、内因性アンチプロテアーゼによって厳密に制御されています。好中球エラスターゼの発現や活性の制御異常は、炎症性の組織障害や宿主―病原体相互作用の変化に関与するとされ、またELANEの変異は顆粒球産生に影響する遺伝性好中球減少症の表現型と関連づけられています。そのため、ELANEは骨髄系分化、プロテアーゼ―アンチプロテアーゼのバランス、ならびに炎症病態モデルにおいて頻繁に研究されています。

Neutrophil Elastase CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ELANEの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Neutrophil Elastase CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ELANE 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はELANE転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Neutrophil Elastaseの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のELANE遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNeutrophil Elastase依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびELANE発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNeutrophil Elastase経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。