Net CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420157

概要

Elk3は、ETSファミリー転写因子Netをコードしており、状況依存的に働く調節因子として、MAPK/ERKシグナル伝達と血清応答因子（SRF）複合体を統合し、即時早期遺伝子プログラムを制御します。Netはプロモーターやエンハンサー上のETSモチーフに結合し、リン酸化状態や補因子の利用可能性に応じて転写抑制因子または転写活性化因子として機能し、増殖・遊走・分化に関連する細胞状態の移行を形作ります。マウス系では、Elk3/Net活性は血管および間質の生物学でしばしば研究されており、ETS–SRF回路が血管新生関連遺伝子の発現や組織リモデリングに影響します。ETS転写ネットワークの制御異常は、がん性シグナル、浸潤性表現型、異常な血管応答に関与するとされ、Elk3は機構解明のための経路解析に有用なノードとなります。

Net CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるElk3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Elk3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Elk3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Netタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Netシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Elk3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Netの機能に不可欠なElk3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Elk3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Net CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNet CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Elk3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Net HDRプラスミド（m）および Net HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはElk3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のElk3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。