Neprilysin-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405449-ACT

MMEL1 codifica a neprilisina-2 (membrane metalloendopeptidase-like 1), uma metaloprotease dependente de zinco expressa na superfície celular e em compartimentos do sistema endomembranar, que contribui para o processamento e a renovação de peptídeos. Por meio da proteólise regulada de peptídeos bioativos, a neprilisina-2 pode influenciar a dinâmica de sinalização local, a composição do microambiente extracelular e a comunicação mediada por receptores, vinculando a atividade de MMEL1 à proteostase e a redes de sinalização inflamatória. Estudos de associação genética conectaram o lócus de MMEL1 a características imunomediadas e à biologia neuroinflamatória, reforçando sua relevância em vias que acoplam o metabolismo de peptídeos à regulação imunológica. Essas características tornam MMEL1 um alvo útil para estudos mecanísticos de sinalização dependente de proteases, comunicação célula–célula e circuitos regulatórios relevantes para doenças.

Neprilysin-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MMEL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Neprilysin-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MMEL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MMEL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Neprilysin-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MMEL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Neprilysin-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Neprilysin-2 em células tumorais com expressão de MMEL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.