nephrin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400368

Descripción general

NPHS1 codifica la nefrina, una proteína transmembrana de la superfamilia de las inmunoglobulinas que es esencial para la arquitectura y las funciones de señalización del diafragma de hendidura de los podocitos en el glomérulo renal. La nefrina participa en la organización de las uniones célula–célula y en la regulación del citoesqueleto de actina mediante interacciones con proteínas adaptadoras y vías posteriores dependientes de fosforilación, lo que ayuda a mantener la integridad de la barrera de filtración. La alteración de NPHS1 compromete la estructura del diafragma de hendidura, modifica la adhesión de los podocitos y la señalización de supervivencia, y se asocia a fenotipos renales proteinúricos, incluido el síndrome nefrótico congénito. Por tanto, NPHS1 es una diana clave para investigar la biología de los podocitos, la dinámica de la barrera de filtración y los mecanismos de señalización en las uniones.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO nephrin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NPHS1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NPHS1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NPHS1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína nephrin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NPHS1 para la investigación de la señalización de nephrin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de NPHS1 críticos para la función de nephrin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NPHS1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido nephrin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido nephrin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NPHS1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR nephrin (h) y el plásmido HDR nephrin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NPHS1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NPHS1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.