Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Nek7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-425603
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Nek7 CRISPR/Cas9 ノックアウト（KO）プラスミド（m）は、GeCKO v2ライブラリ由来の配列を用いて最大のノックアウト効率を実現するよう設計された、Cas9ヌクレアーゼおよび標的特異的な20塩基対のガイドRNA（gRNA）をそれぞれコードするプラスミドのプールです
- gRNA配列は、Cas9を誘導してNek7ゲノム座において部位特異的な二本鎖切断（DSBs）を引き起こし、非相同末端結合（NHEJ）を介して遺伝子ノックアウトをもたらします
- ピューロマイシン耐性遺伝子とRFP遺伝子はLoxP部位で挟まれているため、安定したノックアウト細胞株を樹立した後、Creリコンビナーゼ（Creベクター：sc-418923）を用いて選択マーカーを除去することができる。
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Nek7 抗体 (B-5): sc-393539
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Nek7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m) | sc-425603 | 20 µg | $397.00 |
概要
Nek7（NIMA関連キナーゼ7）はセリン／スレオニンキナーゼであり、有糸分裂の進行を制御する主要な調節因子として、中心体の機能、紡錘体形成、そして正確な染色体分配を協調的に制御します。増殖細胞では、Nek7シグナル伝達が細胞周期の移行と微小管ダイナミクスを支え、キナーゼによる制御を、細胞骨格の構築やゲノム安定性を維持するチェックポイント機構と結び付けています。さらにNek7は、NLRP3インフラマソーム活性化の制御を介した自然免疫シグナル伝達にも関与するとされ、細胞周期キナーゼと炎症経路の出力との関連を示しています。そのため、Nek7の活性または発現の異常は、マウスモデル系における異常増殖、染色体不安定性、ならびに炎症関連表現型の研究において重要です。
Nek7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNek7遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Nek7内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。
このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Nek7のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Nek7タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。
このCRISPRノックアウトシステムにより、Nek7シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Nek7欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。
主な特徴
- Nek7の機能に不可欠なNek7エクソンを標的とするsgRNA
導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
ノックアウト効率を向上させるための、Nek7ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
トランスフェクションによる導入に対応
設計バリエーション
CRISPRs +/- HDR
- Nek7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNek7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Nek7遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
Nek7 HDRプラスミド（m）および Nek7 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNek7ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNek7標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。