NDRG1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402294-ACT

NDRG1 (gene 1 regulado a jusante de N-myc) codifica uma proteína citoplasmática responsiva ao estresse, implicada na diferenciação celular, na homeostase de lipídios e ferro e na modulação de redes de transdução de sinal. O NDRG1 é regulado por hipóxia, p53 e pela sinalização oncogênica de MYC, e tem sido associado a vias que controlam a proliferação, a dinâmica epitélio–mesênquima e as respostas ao estresse celular. Na biologia humana, a expressão alterada de NDRG1 tem sido associada à progressão tumoral e ao comportamento metastático em múltiplos contextos teciduais, bem como a fenótipos hereditários de neuropatia periférica. Essas características tornam o NDRG1 um nó útil para dissecar programas transcricionais que conectam o estresse do microambiente a mudanças no estado celular.

NDRG1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NDRG1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NDRG1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NDRG1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NDRG1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NDRG1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NDRG1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NDRG1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NDRG1 em células tumorais com expressão de NDRG1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.