Plásmido Doble Nickase (h) NDH II: sc-402757-NIC

DHX9 codifica NDH II, una helicasa multifuncional DExH-box dependiente de ATP que se une al ADN y al ARN para remodelar estructuras de ácidos nucleicos durante la transcripción, el procesamiento de ARN y el mantenimiento del genoma. NDH II participa en la vigilancia y resolución de R-loops, favorece la progresión de la horquilla de replicación y se integra con las vías de respuesta al daño del ADN, incluidos mecanismos acoplados a la recombinación homóloga y a la señalización de puntos de control. Por sus funciones en coordinar la transcripción con el metabolismo del ARN y en preservar la estabilidad genómica, DHX9 se examina con frecuencia en estudios sobre respuestas al estrés y la homeostasis alterada de híbridos ARN–ADN. La actividad alterada de DHX9 se ha vinculado a programas de empalme aberrantes y a fenotipos de inestabilidad cromosómica relevantes para la investigación mecanística en biología del cáncer y el estrés genómico asociado a la neurodegeneración.

NDH II El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DHX9 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DHX9. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DHX9. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DHX9 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.