NCX2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403352-ACT

SLC8A2 codifica o trocador humano Na⁺/Ca²⁺ NCX2, um antiporte da membrana plasmática que acopla o gradiente de Na⁺ à extrusão de Ca²⁺ ou, sob condições eletroquímicas específicas, à entrada de Ca²⁺. Ao modular a dinâmica do Ca²⁺ citosólico, o NCX2 influencia a sinalização dependente de atividade, a excitabilidade da membrana e a ativação de enzimas dependentes de Ca²⁺, integrando-se a vias que regulam a transmissão sináptica e a homeostase neuronal. Alterações na troca sódio–cálcio podem perturbar o manejo de Ca²⁺ e a resiliência celular ao estresse iônico, tornando o SLC8A2 um alvo relevante para estudar mecanismos ligados à disfunção neurológica e à neurodegeneração. Seu perfil de expressão enriquecido em neurônios também favorece investigações sobre a regulação de Ca²⁺ específica por região e por tipo celular em sistemas modelo humanos.

NCX2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC8A2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NCX2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC8A2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC8A2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NCX2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC8A2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NCX2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NCX2 em células tumorais com expressão de SLC8A2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.