NCS-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404303

Visão geral

NCS1 codifica o sensor neuronal de cálcio-1 (NCS-1), uma proteína conservada de ligação a Ca²⁺ do tipo EF-hand que converte transientes intracelulares de cálcio em sinais de saída em membranas e sinapses. O NCS-1 regula processos como o tráfego de vesículas e a exocitose, o crescimento de neuritos e a modulação da função de recetores e canais iónicos por meio de interações com alvos como as fosfatidilinositol 4-quinases e complexos de sinalização que moldam vias dependentes de fosfoinositídeos. Em células humanas, o NCS-1 contribui para o controlo dependente de cálcio da excitabilidade neuronal e da plasticidade sináptica, ligando o fluxo de Ca²⁺ induzido por estímulos a respostas adaptativas a jusante. Alterações na expressão ou na sinalização do NCS-1 têm sido investigadas no contexto de fenótipos neuropsiquiátricos e neurodegenerativos, apoiando a sua relevância para estudos mecanísticos da desregulação da sinalização do cálcio.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO NCS-1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene NCS1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do NCS1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do NCS1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína NCS-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de NCS1 para a investigação da sinalização de NCS-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) NCS1 críticos para a função NCS-1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos NCS1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo NCS-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo NCS-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus NCS1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo NCS-1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR NCS-1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia NCS1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo NCS1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.