NAT-10 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406713-ACT

Il gene umano **NAT10** codifica **NAT-10**, un’acetiltransferasi che modifica la citidina nell’RNA e acetila substrati proteici, supportando la biogenesi dei ribosomi, il metabolismo dell’RNA e l’omeostasi nucleolare. L’attività di NAT-10 è stata associata alla deposizione di **N4-acetilcitidina (ac4C)** su mRNA e rRNA, influenzando la stabilità dei trascritti e l’efficienza della traduzione; inoltre partecipa a processi legati alla cromatina e alla replicazione che modulano la progressione del ciclo cellulare. Attraverso queste funzioni, NAT10 si interseca con vie di risposta allo stress e con la regolazione di programmi di espressione genica che governano proliferazione e differenziamento. Un’espressione o un’attività deregolata di NAT10 è stata riportata in diversi contesti patologici, inclusi fenotipi di crescita associati al cancro e difetti cellulari legati al neurosviluppo o all’invecchiamento precoce, rendendolo un nodo rilevante per studi meccanicistici.

NAT-10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NAT10 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NAT-10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NAT10 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NAT10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NAT-10. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NAT10 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NAT-10 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NAT-10 nelle cellule tumorali con espressione di NAT10 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.