NALP1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402588-ACT

ヒトNLRP1（NALP1）は、細胞質に存在するパターン認識受容体をコードしており、細胞ストレスシグナルや病原体関連の刺激に応答してインフラマソームの組み立てを開始（核形成）します。活性化されると、NALP1はASC依存的なカスパーゼ1の活性化を促進し、IL-1βおよびIL-18の成熟を駆動するとともに、自然免疫による検知を炎症性細胞死プログラムへと結び付けます。この経路はNF-κBによるプライミング、タンパク質恒常性（プロテオスタシス）、および危険シグナル伝達と交差し、サイトカイン産生やバリア免疫の形成に影響を与えます。NLRP1シグナルの異常は、自己炎症性・自己免疫性の表現型、炎症性皮膚疾患、さらに組織恒常性と宿主防御に関わるより広範な炎症性疾患メカニズムに関与するとされています。

NALP1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NLRP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NALP1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NLRP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNLRP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NALP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNLRP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNALP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNLRP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNALP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。