N-RAP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408143-ACT

O NRAP humano codifica a N-RAP, uma estrutura de suporte citoesquelética enriquecida em músculo estriado que coordena a montagem das miofibrilas ao ligar filamentos de actina a estruturas contendo α-actinina nos discos Z e nos costâmeros em desenvolvimento. Por meio de interações com proteínas sarcoméricas e associadas à membrana, a N-RAP contribui para a organização da arquitetura contrátil e para processos de mecanotransdução que moldam a diferenciação e a estabilidade das células musculares. Alterações na expressão do NRAP ou variantes têm sido associadas a disfunções do músculo cardíaco e esquelético em contextos genéticos e de remodelamento, tornando-o relevante para vias que regulam a manutenção do sarcômero, a adaptação ao estresse e programas gênicos específicos do músculo. Assim, o NRAP é frequentemente estudado em modelos de miopatia e cardiomiopatia, bem como em sistemas que investigam o remodelamento do citoesqueleto e a maturação muscular.

N-RAP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NRAP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

N-RAP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NRAP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NRAP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de N-RAP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NRAP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de N-RAP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via N-RAP em células tumorais com expressão de NRAP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.