Myosin Va CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402108

概要

MYO5Aは、皮質アクチンネットワークに沿って膜結合性オルガネラやタンパク質複合体を長距離輸送する原動力となる、アクチン依存性モータータンパク質であるミオシンVaをコードしています。ミオシンVaはRab GTPアーゼおよびアダプタータンパク質と協調して、小胞輸送、エンドサイトーシス後のリサイクリング、分泌顆粒の動態、ならびにニューロン、メラノサイト、免疫細胞におけるカーゴの極性輸送を制御します。これらの過程は、シナプス機能、メラノソームの分布、細胞の極性化に寄与し、MYO5Aの機能が破綻すると神経系および色素関連の表現型に結びつきます。ヒト細胞モデルでは、ミオシンVa依存的輸送の変化が、疾患関連の細胞機能障害に関与する区画化シグナル伝達や細胞骨格構築に影響を及ぼし得ます。

Myosin Va CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMYO5A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MYO5A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MYO5Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Myosin Vaタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Myosin Vaシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MYO5A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Myosin Vaの機能に不可欠なMYO5Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MYO5Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Myosin Va CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMyosin Va CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MYO5A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Myosin Va HDRプラスミド（h）および Myosin Va HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMYO5Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMYO5A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。