Plásmido CRISPR de Activación (h) MYL9: sc-401577-ACT

MYL9 codifica la cadena ligera de miosina 9, una cadena ligera reguladora que modula la actividad motora de la miosina II no muscular mediante un control dependiente de la fosforilación de la contractilidad actomiosínica. Actúa aguas abajo de las vías de señalización RHOA/ROCK y Ca2+/calmodulina–MLCK para influir en la formación de fibras de estrés, la dinámica de las adhesiones focales, la citocinesis y la tensión en las uniones célula–célula. Al moldear la mecánica del citoesqueleto, MYL9 contribuye a la migración celular y a programas contráctiles tipo músculo liso vascular en contextos estromales y endoteliales. La contractilidad asociada a MYL9 desregulada se ha relacionado con procesos de remodelación patológica relevantes para la fibrosis, la disfunción vascular y cambios en el microambiente tumoral.

MYL9 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MYL9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MYL9 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MYL9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MYL9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MYL9. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MYL9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MYL9 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MYL9 en células tumorales con expresión de MYL9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.