MYL9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401577-ACT

MYL9 codifica a cadeia leve 9 da miosina, uma cadeia leve regulatória que modula a atividade motora da miosina II não muscular por meio do controlo dependente de fosforilação da contratilidade actomiosínica. Atua a jusante das vias de sinalização RHOA/ROCK e Ca2+/calmodulina–MLCK, influenciando a formação de fibras de stress, a dinâmica das adesões focais, a citocinese e a tensão nas junções célula–célula. Ao moldar a mecânica do citoesqueleto, MYL9 contribui para a migração celular e para programas contráteis semelhantes aos do músculo liso vascular em contextos estromais e endoteliais. A desregulação da contratilidade associada a MYL9 tem sido ligada a processos patológicos de remodelação relevantes para fibrose, disfunção vascular e alterações no microambiente tumoral.

MYL9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MYL9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MYL9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MYL9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MYL9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MYL9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MYL9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MYL9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MYL9 em células tumorais com expressão de MYL9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.