MYL2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402798-ACT

MYL2 codifica a cadeia leve regulatória 2 da miosina ventricular/cardíaca, um componente do complexo de miosina II responsivo ao Ca2+ que modula o ciclo de formação e desfazimento das pontes cruzadas actina–miosina e a geração de força contrátil no músculo estriado. Por meio do controle, dependente de fosforilação, da atividade motora da miosina, o MYL2 contribui para a organização do sarcômero, a mecânica dos cardiomiócitos e as vias de acoplamento excitação–contração que coordenam o débito cardíaco. Alterações na expressão ou na função de MYL2 estão implicadas em cardiomiopatias hereditárias e adquiridas, nas quais a desregulação sarcomérica pode afetar a estrutura e o desempenho do miocárdio. Como marcador e regulador da diferenciação e da contratilidade do músculo cardíaco, MYL2 é amplamente utilizado em estudos de desenvolvimento cardíaco, modelagem de doenças e mecanobiologia.

MYL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MYL2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MYL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MYL2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MYL2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MYL2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MYL2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MYL2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MYL2 em células tumorais com expressão de MYL2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.