Myf-5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400449

Visão geral

O MYF5 codifica o fator regulador miogênico humano Myf-5, um fator de transcrição do tipo hélice-alça-hélice básico (bHLH) que atua precocemente na determinação da linhagem de músculo esquelético e no comprometimento de mioblastos. O Myf-5 regula programas de expressão gênica que conduzem a diferenciação miogênica por meio da heterodimerização com proteínas E e da ligação a motivos E-box em elementos regulatórios específicos de músculo. Ele atua em redes do desenvolvimento que coordenam a miogênese, incluindo regulação cruzada com outros membros da família MRF, como MYOD1 e MYOG, influenciando decisões de destino celular e o timing da diferenciação. A desregulação do controle transcricional associado ao MYF5 é relevante para estudos de miopatias congênitas, defeitos de regeneração muscular e contextos tumorais que apresentam expressão aberrante de fatores miogênicos ou bloqueio de diferenciação.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Myf-5 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene MYF5 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do MYF5, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do MYF5 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Myf-5.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de MYF5 para a investigação da sinalização de Myf-5, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) MYF5 críticos para a função Myf-5
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos MYF5 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Myf-5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Myf-5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus MYF5. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Myf-5 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Myf-5 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia MYF5 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo MYF5 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.