Myc Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400001-ACT

MYC codifica o fator de transcrição Myc, um regulador central do crescimento, metabolismo e proliferação celular, que modula a transcrição dependente da RNA polimerase II ao se ligar a elementos E-box e coordenar o recrutamento de cofatores associados à cromatina. Myc integra sinais de vias mitogênicas como RTK/RAS/MAPK e PI3K/AKT/mTOR, moldando programas que controlam a biogênese de ribossomos, a síntese de nucleotídeos, a função mitocondrial e a progressão do ciclo celular. A regulação rigorosa da expressão de MYC é essencial para manter a diferenciação e a homeostase tecidual, enquanto a desregulação é frequentemente associada à instabilidade genômica, a estados metabólicos alterados e à reprogramação transcricional oncogênica. Por isso, MYC é amplamente estudado por seus papéis na biologia tumoral, nas respostas ao estresse e no controle transcricional dependente do contexto.

Myc O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MYC sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Myc O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MYC em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MYC, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Myc. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MYC nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Myc no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Myc em células tumorais com expressão de MYC silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.