MXRA7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416018-ACT

MXRA7 (matrix remodeling associated 7) codifica uma proteína secretada, associada à matriz extracelular, implicada na remodelação tecidual e na comunicação célula–matriz. Em humanos, a MXRA7 tem sido associada à regulação da organização da matriz extracelular, à dinâmica da adesão celular e a alterações no microambiente inflamatório que podem influenciar a migração e as respostas do estroma. Foram descritos padrões de expressão alterados em contextos que envolvem remodelação do tipo fibrótica e biologia estromal associada a tumores, apoiando a sua relevância para estudos de sinalização orientada pela matriz. Como fator associado à matriz, a MXRA7 é frequentemente investigada em conjunto com vias que controlam a reparação de feridas, o recrutamento de células imunitárias e as interações MEC–recetor.

MXRA7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MXRA7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MXRA7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MXRA7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MXRA7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MXRA7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MXRA7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MXRA7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MXRA7 em células tumorais com expressão de MXRA7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.