Plásmido Doble Nickase (h) MUTYH: sc-404076-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)MUTYH consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa MUTYH (h) y el plásmido de doble nickasa MUTYH (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a MUTYH. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: MUTYH Anticuerpo (C-6): sc-374571
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) MUTYH | sc-404076-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) MUTYH | sc-404076-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MUTYH codifica una ADN glicosilasa que inicia la reparación por escisión de bases al reconocer y escindir adeninas mal apareadas con 8-oxo-7,8-dihidroguanina, limitando así las transversiones G:C→T:A causadas por el daño oxidativo del ADN. Esta actividad contribuye al mantenimiento del genoma durante la replicación y se integra con factores posteriores de la BER y con procesos de reparación asociados a la replicación para preservar la integridad cromosómica. La alteración o reducción de la función de MUTYH se asocia con un aumento de la carga mutacional y la inestabilidad genómica, con especial relevancia en la predisposición a tumores colorrectales y en fenotipos relacionados con defectos de reparación del ADN. En consecuencia, MUTYH se estudia con frecuencia en las respuestas al estrés oxidativo, las vías de prevención de mutaciones y los mecanismos que moldean las firmas de mutación somática.
MUTYH El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MUTYH en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MUTYH. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MUTYH. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MUTYH alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.