Munc13-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423611

概要

Unc13b は、シナプス小胞を放出準備完了状態へ成熟させ、Ca²⁺誘発性の神経伝達物質放出を効率化するために必要な、シナプス前終末のアクティブゾーンにおけるプライミング因子 Munc13-2 をコードしている。Munc13-2 は SNARE 制御因子および RIM/Rab3 ネットワークと協調して、ドッキング、プライミング、短期可塑性を統合的に調節し、その結果としてシナプス強度と回路活動を形成する。Munc13-2 は C1 および C2 ドメインを介して、ジアシルグリセロールおよび Ca²⁺依存性シグナルを統合し、放出確率や小胞プール動態を微調整する。小胞プライミングやシナプス伝達の破綻は、神経発達および神経精神疾患に関連する表現型と広く関わることから、神経シグナル伝達やネットワーク機能障害における Unc13b の機構的理解を目的とした研究が促されている。

Munc13-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるUnc13b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Unc13b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Unc13bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Munc13-2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Munc13-2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Unc13b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Munc13-2の機能に不可欠なUnc13bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Unc13bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Munc13-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびMunc13-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Unc13b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Munc13-2 HDRプラスミド（m）および Munc13-2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUnc13bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUnc13b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。