MUL1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409323-ACT

A MUL1 humana (ativador 1 da ligase de ubiquitina mitocondrial de NF-κB 1), também conhecida como Mulan/MAPL, codifica uma ligase de ubiquitina E3 da membrana externa da mitocôndria que molda o controle de qualidade mitocondrial por meio da ubiquitinação de substratos mitocondriais. A MUL1 se relaciona com a dinâmica mitocondrial ao modular a maquinaria de fusão e fissão e contribui para a mitofagia, influenciando assim a homeostase bioenergética e a adaptação ao estresse celular. Por meio de interações entre a sinalização por ubiquitina e vias inatas de estresse, a MUL1 pode afetar a suscetibilidade à apoptose e os desfechos de sinalização inflamatória. A atividade ou expressão desregulada de MUL1 tem sido implicada em fenótipos relevantes para neurodegeneração, disfunção metabólica e respostas de estresse em células tumorais, sustentando seu uso como um nó mecanístico em pesquisas sobre sinalização mitocondrial.

MUL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MUL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MUL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MUL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MUL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MUL1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MUL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MUL1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MUL1 em células tumorais com expressão de MUL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.