Mucin 5B/MUC5B Double Nickaseプラスミド (h): sc-401077-NIC

MUC5Bはムチン5Bをコードする遺伝子であり、ムチン5Bは高分子量の、ゲル形成性の分泌型ムチンです。ムチン5Bは高度にO-グリコシル化されており、ジスルフィド結合によって重合することで、気道をはじめとする粘膜上皮における粘液バリアを形成します。このバリアは、粘液の粘弾性特性を規定し、微生物や粒子状物質との相互作用に影響を与えることで、粘液線毛クリアランス、水分保持、ならびに自然免疫防御を調節します。MUC5Bの発現は、上皮分化プログラムおよび炎症性シグナル伝達経路によって制御されており、サイトカイン駆動性の転写応答や、ムチン生合成を支えるER–ゴルジ体の分泌プロセシングが関与します。MUC5B量の異常や粘液特性の変化は、慢性気道疾患や肺線維化病態との関連が示唆されており、上皮恒常性と粘膜防御機構を研究する上で重要な標的となっています。

Mucin 5B/MUC5B ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MUC5B 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MUC5B内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MUC5Bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MUC5Bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。