mTOR Double Nickaseプラスミド (h): sc-400140-NIC

MTORは、セリン／スレオニンキナーゼであるmTORをコードしており、成長因子、栄養、エネルギー、ストレスといったシグナルを統合して、細胞代謝と恒常性を協調的に制御する中心的な因子である。mTORはmTORC1およびmTORC2の複合体として機能し、S6Kおよび4E-BP1を介したタンパク質合成と細胞増殖の制御、ULK1シグナル伝達を介したオートファジーの制御、さらにAKTおよびSGK経路を介した細胞骨格の構築と生存シグナルの制御に関与する。mTORシグナルの破綻は、がん生物学における増殖異常や代謝リプログラミングに関与することが示されているほか、神経発達性および神経変性の表現型、ならびに心代謝機能障害にも寄与する。mTORはPI3K–AKT–mTORシグナルとAMPKシグナルの結節点に位置するため、MTORの摂動は、経路間クロストーク、ストレス応答、翻訳制御を解析する目的で広く用いられている。

mTOR ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MTOR 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MTOR内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MTORの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MTORが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。