MT-MMP-4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h2): sc-405757-ACT-2

O MMP17 humano codifica a MT-MMP-4 (metaloproteinase de matriz 17), uma metaloprotease do tipo membranar ancorada por glicosilfosfatidilinositol (GPI) que medeia a proteólise pericelular para regular a remodelação da matriz extracelular e as interações célula–matriz. Ao processar componentes da matriz e modular a disponibilidade de sinais bioativos, a MT-MMP-4 influencia vias relacionadas à morfogênese tecidual, à migração celular e à dinâmica do microambiente inflamatório. A atividade desregulada de MMP17 tem sido associada a contextos de remodelação patológica, incluindo invasão tumoral e processos fibróticos ou inflamatórios, nos quais um desequilíbrio de proteases pode remodelar a arquitetura extracelular e a sinalização. Estudos de edição gênica e genômica funcional direcionados a MMP17 sustentam a investigação mecanística da regulação de proteases ancoradas à membrana, da especificidade de substrato e de fenótipos dependentes da matriz extracelular em modelos de células humanas e organoides.

MT-MMP-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MMP17 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MT-MMP-4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MMP17 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MMP17, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MT-MMP-4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MMP17 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MT-MMP-4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MT-MMP-4 em células tumorais com expressão de MMP17 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.