Particules Lentivirales d'Activation (h) MSH2: sc-400966-LAC

MSH2 code un facteur central de la réparation des mésappariements de l’ADN (MMR), qui forme un hétérodimère avec MSH6 (MutSα) ou MSH3 (MutSβ) afin de reconnaître les mésappariements base–base et les boucles d’insertion/délétion apparaissant lors de la réplication. Après reconnaissance de la lésion, les complexes contenant MSH2 coordonnent les étapes de réparation en aval avec MLH1/PMS2 et des facteurs associés à la réplication, afin de préserver la stabilité du génome et de limiter la mutagenèse. La perturbation du MMR dépendant de MSH2 favorise l’instabilité des microsatellites et une charge mutationnelle élevée, reliant le dysfonctionnement de MSH2 à la biologie tumorale héréditaire et sporadique. MSH2 est également impliqué dans les réponses cellulaires à certains agents endommageant l’ADN et au stress de réplication, ce qui en fait un point d’intérêt pour étudier les interactions entre voies de réparation de l’ADN.

Les particules d'activation lentivirales MSH2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de MSH2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales MSH2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription MSH2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de MSH2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif MSH2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.