Partículas Lentivirales de Activación (h) MRP3: sc-401508-LAC

ABCC3 codifica el transportador de la familia ABC MRP3 (ABCC3), una bomba de eflujo basolateral que exporta un amplio espectro de aniones orgánicos, incluidos conjugados de glucurónido, sulfato y glutatión. MRP3 apoya la desintoxicación de fase II al acoplar la formación de conjugados con su exportación celular, influyendo en el manejo hepático e intestinal de xenobióticos, la homeostasis de los ácidos biliares y las respuestas al estrés inflamatorio. Su actividad se relaciona con la disposición de fármacos y con funciones de barrera reguladas por transportadores, lo que convierte a ABCC3 en un nodo relevante en estudios de vías orientados a la farmacología y en modelos de disfunción hepatobiliar, señalización asociada a la colestasis y fenotipos de quimiorresistencia mediados por transportadores. Se ha informado de una expresión desregulada de ABCC3 en varios contextos de enfermedad en los que la alteración del flujo de metabolitos conjugados y del equilibrio redox contribuye a la adaptación celular.

Las partículas de activación lentiviral MRP3 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de ABCC3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral MRP3 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción ABCC3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de MRP3. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo ABCC3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.