MRP3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401508-ACT

O ABCC3 codifica o transportador humano da família ATP-binding cassette MRP3, uma bomba de efluxo basolateral que exporta uma ampla gama de ânions orgânicos, incluindo conjugados de glucuronídeo e sulfato e ácidos biliares. O MRP3 sustenta a desintoxicação hepática e a circulação entero-hepática ao coordenar a depuração de metabólitos e modular a exposição intracelular a xenobióticos, conectando a atividade do transportador ao metabolismo de fase II e a respostas celulares ao estresse. Sua expressão é regulada em contextos de colestase e de sinalização inflamatória, e alterações na atividade de ABCC3/MRP3 têm sido associadas à variabilidade na disposição de fármacos e à disfunção hepatobiliar em modelos experimentais. Essas propriedades tornam o ABCC3 um alvo útil para estudar barreiras mediadas por transportadores, reprogramação metabólica e respostas adaptativas em sistemas hepáticos e epiteliais.

MRP3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ABCC3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MRP3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ABCC3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ABCC3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MRP3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ABCC3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MRP3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MRP3 em células tumorais com expressão de ABCC3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.